Op wat voor oppervlakken kan het gebruikt worden
Acid Violet 17 (AV17) is een kleurstofoplossing voor sporen gezet in bloed op basis van een mengsel van water, ethanol en azijnzuur [1]. De oplossing kleurt bloedsporen paars (vergelijkbare kleur als Coomassie Blue en LCV). Acid Violet 17 kan gebruikt worden op absorberende opppervlakken (bijvoorbeeld textiel) maar zal dan wel een achtergrondkleuring veroorzaken. De CAST manual beveelt aan om zowel Amido Black als AV17 te testen op een klein stukje van een item, weg van de plaats waar een spoor vermoed wordt, om te zien welke van de twee de minste achtergrondkleuring veroorzaakt.
Acid Violet 17 kan gebruikt worden nadat Acid Yellow 7 is gebruikt maar kan een lager contrast geven dan wanneer het alleen gebruikt zou wezen.
In zijn algemeenheid moeten voor het kleuren sporen in bloed altijd gefixeerd worden om doorlopen van het spoor (verlies van details) te voorkomen. De enige uitzondering op deze regel is leucokristalviolet (LCV) omdat hier al fixatief (5-sulfosalicylzuur) in de oplossing zit. Echter wanneer mogelijk wordt dit toch aangeraden om het doorlopen van bloesporen zoveel als mogelijk is te voorkomen.
Fixeren van bloedsporen
Fixeren kan gedaan worden met een 2%-ige oplossing van 5-sulfosalicylzur in water (20-23 gram in 1 liter demi-water of gedestilleerd water). Om er zeker van te zijn dat het bloedspoor goed gefixeerd is bevelen wij de volgende methode aan die gebruik maakt van absorberend papier (zoals filtreerpapier, tissues, papieren handdoeken) en een spuitfles met sulfosalicylzuuroplossing.
Neem een droog stuk absorberend papier dat groot genoeg om het te fixeren spoor te bedekken. Houd het papier boven het spoor, parallel met het oppervlak en laat dan één zijde van het papier op het oppervlak vallen (bijvoorbeeld een korte zijde als het een schoenspoor betreft). Doordrenk dit deel met fixeeroplossing over de gehele zijde, dit deel fungeert nu als een soortement anker.
Maak het gehele papier nu nat met de spuitfles, vanaf de kant die al op/langs het spoor ligt en laat het natte deel steeds op het spoor zakken. Dit voorkomt zoveel mogelijk dat luchtbellen tussen het papier en het spoor komen. Werk rustig (het papier zet uit wanneer het nat wordt) en als het spoor schuin ligt in het verticale vlak (of zo gehouden kan worden) begin dan aan de hoge kant en werk naar beneden.
Wanneer het natte papier het gehele spoor bedekt, laat het dan minstens 3 minuten liggen. Wanneer het bloed een dikke laag is 5 minuten of langer. Verwijder daarna het papier. Op het spoor achtergebleven fixatief kan met water weggespoeld worden, maar dat is niet noodzakelijk.
Wanneer het bloed relatief vers is zal een kleurverschil van donkerrood naar donkerbruin opgetreden zijn.
Werkwijze voor het kleuren
Als het spoor eenmaal gefixeerd is kan het gekleurd worden met de Acid Violet 17-oplossing. Gebruik een spuitfles of sproeiflacon om de kleurstofoplossing aan te brengen. Met vingerafdrukken kan een pipet gebruikt worden of met een voorwerp van niet al te grote afmetingen door onderdompelen in een container/bad met kleurstofoplossing.
Het gebruik van een sproeiflacon heeft t.o.v. het gebruik van een spuitfles het nadeel dat er meer ethanoldamp in de lucht zal komen. Ook is het gebruik van een stofmasker om het inademen van de sproeinevel te voorkomen aan te raden.
Nadat de kleurstofoplossing is opgebracht laat het dan 1-3 minuten in contact met het spoor. Spoel daarna het oppervlak met hetzelfde mengsel van water/ethanol/azijnzuur als gebruikt voor de kleurstofoplossing.
Water kan ook gebruikt worden voor het spoelen, maar zal een hogere achtergrondkleuring geven. Als de afdrukken op de vloer zitten kan de spoeloplossing ook weggezogen worden met een waterstofzuiger. Absorberend papier zoals toegepast bij het fixeren, kan ook gebruikt worden.
Afnemen en fluorescentie
Met AV17 gekleurde afdrukken kunnen fluoresceren onder groen licht maar de fluorescentie is vaak zwak. Acid Violet 17 gekleurde sporen kunnen afgenomen worden met witte folie (maar dat gaat veel langzamer dan met Acid Yellow 7 - ongeveer 15 minutes in plaats van een paar minuten met AY7). Met liften van de sporen kunnen achtergronden en/of achtergrondfluoresentie geëlimineerd worden. Met witte folie opgenomen sporen fluoresceren sterker dan op het oppervlak zelf.
Voordat begonnen kan worden met het afnemen van het spoor met een witte gellifter moet het helemaal droog zijn. Zorg er absoluut voor dat er geen luchtbellen tussen de folie en het spoor komen te zitten bij het opbrengen van de folie. Laat de folie een behoorlijk lange tijd liggen, in de orde van 15 minuten. Fotograferen van de opgenomen sporen moet binnen een paar uur gebeuren. De kleurstof zal namelijk langzaam in alle richtingen door de folie gaan diffunderen. Het spoor verliest daardoor aan scherpte.
Afnemen van het spoor kan meerdere keren gedaan worden, al of niet met tussendoor opnieuw kleuren. In belangrijke zaken is het aan te raden om het afnemen en kleuren meerdere keren te proberen.
Fluorescentie wordt opgewekt met groen licht (480-545 nm). Een rood filter wordt gebruikt als camerafilter.
Veiligheid
Acid Violet 17 poeder is niet gekenmerkt als een gevaarlijke stof. Aangezien de werkoplossing gebaseerd is op een water-ethanol mengsel worden bij normaal gebruik geen schadelijke dampen gevormd, al kan de azijngeur irritant zijn. Bij het gebruik van grote hoeveelheden of wanneer de temperatuur hoog genoeg is kan bij onvoldoende ventilatie een potentieel explosief ethanol-lucht mengsel gevormd worden. Verder kleurt de Acid Violet 17-oplossing de huid en kleding.
5-Sulfosalicylzuurpoeder is gekenmerkt als een irritante stof, maar de 2%-ige oplossing is geen gevaarlijk mengsel. Gezien het fixerende effect op bloed adviseren wij echter toch om bij gebruik handschoenen (nitril-, vinyl- of latexhandschoenen voldoen) te dragen. Gebruik van een bril is ook geen slecht idee.
Vermijd het inademen van sproeinevels (aerosols) en dampen van de fixeer, spoelvloeistof en Acid Violet 17-oplossing. Vermijd evenzo contact met de oplossing en het Acid Violet 17-poeder. Na ieder gebruik handen wassen, speciaal voordat gegeten of gedronken wordt.
Samenstelling van de oplossingen
Acid Violet 17
| 1 gram | Acid Violet 17 |
| 50 ml | azijnzuur ("ijsazijn", 99%) |
| 250 ml | ethanol (98% of hoger) |
| 700 ml | gedemineraliseerd of gedestilleerd water |
| -------- | |
| 1000 ml | werkoplossing |
Gebruik bij voorkeur een erlenmeyer voor het aanmaken van de Acid Violet 17-oplossing. Voeg eerst water toe aan de afgewogen hoeveelheid Acid Violet 17-poeder en los dit op door zwenken of met behulp van een magneetroerder en een roervlo/roerboon (magneet overtrokken met PTFE). Het poeder lost op in water maar door de sterke kleur van de oplossing zal dat moeilijk te zien zijn. Neem voldoende tijd om het poeder de gelegenheid te geven op te lossen. Voeg daarna de ethanol en azijnzuur toe (de volgorde is niet belangrijk)). Men kan ook eerst de Acid Violet 17 in het ethanol/azijnzuur mengsel oplossen en dan verdunnen met water. Tenslotte kan met ook alles bij elkaar doen en dan op laten lossen onder roeren.
Bloedfixeer
| 20-23 grams | 5-sulfosalicylzuur, dihydraat |
| 1000 ml | gedemineraliseerd of gedestilleerd water |
| -------- | |
| 1000 ml | werkoplossing |
Voeg de componenten bij elkaar in een beker of erlenmeyer/fles van voldoende grootte en meng totdat alles opgelost is. Gebruik van een magneetroerder met roerboon is aan te raden.
Spoeloplossing
| 50 ml | azijnzuur ("ijsazijn", 99%) |
| 250 ml | ethanol (98% of hoger) |
| 700 ml | gedemineraliseerd of gedestilleerd water |
| --------- | |
| 1000 ml | spoeloplossing |
Referenties en voetnoten
[1] Sears, V.G.; Butcher, C.P.G.; Prizeman, T.M. "Enhancement of Fingerprints in Blood - Part 2: Protein Dyes" Journal of Forensic Identification 2001, Vol. 51, No. 1, p. 28-38.
Naam: Acid Violet 17, CI 42650, Coomassie Violet R-150, Benzenemethanaminium, N-[4-[[4-(diethylamino)phenyl][4-[ethyl[(3-sulfophenyl)methyl]amino]phenyl]methylene]-2,5-cyclohexadieen-1-ylidene]-N-ethyl-3-sulfo-, intern zout, natriumzout (1:1)
CAS Nr.: 4129-84-4
